PCR-analyse: hvad er det? Sådan skal du tage PCR-analysen

Det ikke så længe siden udviklet en pålidelig, meget følsom og hurtig metode til diagnosticering af forskellige infektionssygdomme hos mennesker. En sådan fremgangsmåde kaldes "PCR-analyse". Hvad er det, hvad er dens essens, hvad han kan identificere mikroorganismer og hvordan man tager det, vil vi beskrive i denne artikel.

Historien om opdagelsen

Opfundet af polymerasekædereaktion (PCR) er en amerikansk videnskabsmand Keri Myullis i 1983. I første omgang den patenterede metode til diagnosticering af "Cetus Corporation", hvor han arbejdede og sit ophav. Men i 1992 alle rettigheder og patenter blev solgt til selskabet "Hoffman-La Roche." Efter dette, viste det sig, at lignende undersøgelser blev udført parallelt og blev rapporteret af andre amerikanske biologer, såsom Elis Chen, David Edgar, John RRE. I 1980 engageret han i dette spørgsmål, og de sovjetiske forskere A. Slyusarenko A. Kaledin og S. Gorodetsky. Derfor, for at bestemme alene ophavsretten den har ikke været muligt. Mange fremragende biokemikere har bidraget til udviklingen af metoder til polymerase reaktion og CERN patenteret deres innovationer. På dette tidspunkt analyse af PCR udføres gennem specielt udstyrede laboratorier.

RESUMÉ PCR diagnostiske

PCR-analyse: hvad er det og hvordan fungerer det? Essensen af metoden ligger i det faktum, at ved hjælp af en speciel enzymet DNA-polymerase in vitro til stigning i specifik mikrobiel miljø volumen. For at gøre dette flere gange formere tilgængelig DNA-materiale. Tilstedeværelsen af et patogen i en prøve mængden vil blive forøget på bekostning af biokemiske laboratorium manipulation og bakterier vil ikke være vanskeligt at opdage i mikroskopet.

Hvordan er studiet af materialet?

For at udføre analyse, der kræves:

• DNA-skabelonen;
• primere materiale forbinder enderne af fragmentet;
• termostabil DNA-polymerase enzym;
• kemikalier, sikre korrekt drift af enzymer;
• pufferopløsning er påkrævet for at skabe de nødvendige betingelser for vækst og udvikling af DNA-materiale.

For at udføre PCR operere 25-30 gentagelser, der består af tre trin: denaturering, annealing og forlængelse.

At analysere polimezarnoy kædereaktion under anvendelse af en særlig anordning - cycler. Moderne udstyr gør det muligt at installere den nødvendige opvarmning og køling rør program til at eliminere fejl under diagnosen.

Hvor ansøges diagnosen?

Polimezarnoy kædereaktion metode anvendes i forskellige medicinske områder:

• Retsmedicinsk brug til at identificere det genetiske materiale, såsom hår, spyt eller blod;
• PCR-analyse af blod bidrager til genotypebestemmelse, for eksempel til påvisning af individuelle genetiske plantet respons på et specifikt lægemiddel;
• ved en metode sæt familiemæssige bånd mellem mennesker;
• mest efterspurgte PCR-fremgangsmåden er blevet i medicinsk diagnose til bestemmelse af forskellige infektionssygdomme.

Hvad infektioner afslører PCR?

Således medicin har længe været anvendt med succes PCR-analyse. Hvad er det, vi har allerede lært. Og nogle patogener kan påvises med det? PCR diagnosticeret følgende infektioner :

• hepatitis A, B, C;
• ureaplasmosis;
• candidiasis;
• klamydia;
• mycoplasmose;
• bakteriel vaginose;
• infektiøs mononukleose;
• trichomoniasis;
• HPV-infektion;
• tuberkulose;
• herpes infektion i 1. og 2. typen;
• Helicobacter pylori infektion;
• cytomegalovirus;
• difteri;
• salmonellose;
• HIV-infektion.

Desuden er PCR-metoder anvendes i diagnosen af cancer.

Fordelene ved fremgangsmåden

Diagnostisk PCR har adskillige fordele:

1. Høj følsomhed. Selv med kun få DNA-molekyler mikroorganisme PCR-analyse bestemmer tilstedeværelsen af infektion. Det hjælper fremgangsmåde til kroniske og latente sygdomme forekommende. Ofte i sådanne tilfælde mikroorganismen er uopdyrket på andre måder.
2. For at undersøge helst egnet materiale, såsom spyt, blod, seksuel udvælgelse, hår, epitelceller. Den mest almindelige er en blodprøve og urogenitale vatpind PCR.

3. Ikke en forlænget voksende kulturer. Den automatiserede proces med diagnostik tillader opnåelse resultaterne af en undersøgelse efter 4-5 timer.
4. Fremgangsmåden er næsten helt autentiske. Optaget kun isolerede tilfælde af falsk-negativt resultat.
5. Evne til at identificere flere typer af patogener i et prøvemateriale. Dette er ikke kun fremskynder processen med diagnosticering af sygdommen, men også reducerer materialeomkostninger betydeligt. Ofte, lægen ordinerer en omfattende analyse af PCR. Prisoversigt, bestående af bestemmelse af seks patogener, er omkring 1.500 rubler.

Anbefalinger om forberedelse til analyse

Resultaterne at være gyldig PCR undersøgelser skal testes ved at følge anbefalingerne fra de foreløbige forberedelser til diagnosen:

1. Før levering af spyt bør afstå fra at spise og medicin i 4 timer før prøvetagning af materialet. Umiddelbart før proceduren, skylle munden med kogt vand.
2. Ovenstående regler skal styres, og når man tager prøven fra indersiden af kinden. Efter skylning anbefales at foretage en let massage på huden til at frigive prostatasekretioner.
3. Urin indsamles normalt i hjemmet. For at gøre dette, er du nødt til at foretage en grundig toilet på kønsdelene. I en steril plastbeholder er nødvendigt at indsamle 50-60 ml urin. Det anbefales til kvinder for at indsætte tampon i skeden, og mænd så meget som muligt for at trække huden fold for at sikre renheden af materialet. Du kan ikke tage materialet under menstruation.
4. Til afgivelse af sædceller til at afholde sig fra samleje i de 3 dage før indsamling af materiale. Desuden er lægerne rådes til at opgive brugen af sauna og varmt bad, alkohol og krydret mad. I 3 timer før analyse er nødvendig for at afstå fra vandladning.
5. For at bestå den urogenitale smøre, for eksempel, hvis analysen på en klamydia-PCR, er både kvinder og mænd anbefales, at seksuel hvile i 3 dage. 2 uger før analysen kan ikke tage antibiotika. For en uge, du har brug for at stoppe med at bruge den intime geler, salver, vaginale stikpiller, douching. 3 timer før undersøgelsen bør afholde sig fra at urinere. Under menstruation hegn materiale ikke udføres, kun 3 dage efter afslutningen af spotting kan tage urogenitale smøre.

PCR under graviditet

Ventetiden for en baby, mange infektionssygdomme, seksuelt overførte sygdomme, er ekstremt farligt for normal fosterudvikling. Kønssygdomme kan udløse intrauterin udvikling, abort eller for tidlig fødsel, medfødte misdannelser hos barnet. Derfor er det vigtigt at få i den tidlige graviditet screening PCR. Pass analyse er nødvendig, når du registrerer - op til 12 uger.

Hegn materiale kommer fra livmoderkanalen med en særlig børster. Proceduren er smertefri og ikke udgør nogen fare for barnet. Normalt under graviditeten analyseret for Chlamydia PCR-metoden, samt ureaplasmosis, mycoplasmose, cytomegalovirus, herpes, papillomavirus. En sådan undersøgelse kompleks kaldet PCR 6.

PCR til diagnose af HIV

Skyldes, at fremgangsmåden til polymerasekædereaktion er meget følsom over for ændringer i kroppen samt betingelserne for diagnose, kan mange faktorer påvirker resultatet. Derfor PCR-analyse for HIV-infektion ikke er en pålidelig fremgangsmåde, dens effektivitet - 96-98%. De resterende 2-4% af testen giver falske positive resultater.

Men i nogle situationer uden PCR-diagnostik af hiv ikke kan gøre. Normalt er det transporteres til folk med falsk-negativ ELISA. Disse tal angiver, at personen endnu ikke har udviklet antistoffer mod virus og kan ikke påvises uden at øge antallet af multiple. At dette kan opnås ved at gennemføre en blodprøve PCR-metode.

Også brug for, er en diagnose af børn første leveår, født til HIV-positive mødre. Metoden er den eneste måde at pålideligt bestemme status for barnet.

PCR til diagnose af hepatitis

Polymerasekædereaktion fremgangsmåde tillader påvisning af DNA af virus af hepatitis A, B, C, godt før dannelsen af antistoffer mod infektion eller symptomdebut. Særlig effektiv er PCR-analysen om hepatitis C, eftersom 85% af en sådan sygdom er asymptomatiske og uden rettidig behandling bliver kronisk.

Rettidig påvisning af patogenet vil bidrage til at undgå komplikationer og langtidsbehandling.

Integreret PCR-screening

Omfattende PCR-analyse: hvad er det? Denne screeningsmetode polimezarnoy kædereaktion, der indbefatter bestemmelse samtidigt flere arter infektion: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealitikum, herpes 1. og 2. typen, gonoré papillomavirus. Prisen for denne diagnose spænder fra 2.000 til 3.500 rubler. afhængigt af klinikken, materialer og udstyr, såvel som af typen af analyse: kvalitativ eller kvantitativ. Det, der er brug for i dit tilfælde - lægen beslutter. I nogle tilfælde, du simpelthen påvise tilstedeværelsen af patogenet i andre, såsom HIV, den vigtige rolle, som kvantitativ titer spillet. benævnt "PCR-analyse af 12" i diagnosen af alle de ovennævnte patogener undersøgelse.

Dechifrere analyseresultaterne

Transskription PCR-analyse er ligetil. Der er kun 2 indeks skala - "negative" "positiv" og Ved detektering af patogenet kan læger med 99% sikkerhed th bekræfte tilstedeværelsen af sygdommen og til at begynde behandling af patienten. I den kvantitative fremgangsmåde til bestemmelse infektion i en tilsvarende kolonne indeks antal detekterede bakterier vil blive specificeret. Kun en læge kan bestemme omfanget af sygdommen og ordinere den nødvendige behandling.

I nogle tilfælde, for eksempel ved bestemmelse HIV-infektion ved PCR, med et negativt resultat, er der behov for yderligere undersøgelser for at bekræfte disse tal.

Hvor til at blive testet?

Hvor pass-PCR-analyse i den offentlige klinik eller et privat laboratorium? Desværre, i den kommunale medicinske institutioner udstyr og metoder er ofte forældet. Derfor er det bedre at give fortrinsret til private laboratorier med moderne udstyr og højt kvalificeret personale. Hertil kommer, at i en privat klinik få dig de resultater meget hurtigere.

I Moskva, mange private laboratorier tilbyder PCR-analyse for forskellige infektioner. For eksempel i sådanne klinikker som "Vita", "Integrated Clinic," "Happy Family", "Uro-Pro", udført PCR-analyse. Undersøgelse prisen er 200 rubler. til bestemmelse af et patogen.

Det kan konkluderes, at diagnosen af infektionssygdomme ved PCR i de fleste tilfælde er en hurtig og pålidelig måde at detektere patogenet i kroppen på de tidlige stadier af infektion. Men i visse tilfælde, at vælge andre metoder til diagnosticering. Bestem behov for en sådan undersøgelse kan kun være en specialist. PCR-analyse Dekryptering kræver også en professionel tilgang. Følg lægens råd og ikke giver deres egne undersøgelser, som ikke er nødvendige.